三級甲等綜合醫(yī)院國營
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級甲等醫(yī)院,是國家衛(wèi)生健康委指定的全國疑難重癥診治指導中心,最早承擔高干保健和外賓醫(yī)療任務的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓國家 級
取材:血液
人巨細胞病毒抗體的測定原理:
HCMV感染的細胞(抗原)+待檢血清+熒光素標記抗人IgG抗體→細胞內(nèi)熒光“+”陽性“-”陰性。假陽性:HCMV在感染人成纖維細胞漿內(nèi)可誘生IgGFc受體,感染后24~48h出現(xiàn),72~96h最明顯,為暗淡的胞漿內(nèi)及濃密的核周熒光,可形成假陽性。可采用稀釋待檢血清1∶40以上,采用不含F(xiàn)c段IgG抗血清,用猴CMV等方法減少或消除。
試劑:
大劑量(MOI)HCMV接種單層細胞,約5~7天后,當CPE達90%時,用EDTA-胰酶消化收集感染細胞;按3∶1與同法制備未感染細胞混合,以提供對照;涂片,每孔約2×104細胞,空氣干燥,冷丙酮固定10min,-70℃保存。
操作方法:用PBS倍比稀釋血清;加入上述制備好的抗原片子孔內(nèi),37℃60min,PBS振洗3min×3,加熒光素-抗人IgG抗體,37℃30min,PBS振洗3min×3,0.2g/L伊文思藍對比染色。
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