三級甲等綜合醫院國營
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取材:血液
血清谷丙轉氨酶的測定原理:
(1)比色法測定:ALT催化基質中的丙氨酸和α-酮戊二酸反應,生成谷氨酸和丙酮酸,后者與2,4-二硝基苯肼作用,生成苯腙,在堿性條件下顯色。
(2)連續監測法:在ALT催化的反應中生成的丙酮酸,被LDH還原成乳酸,并使NADH氧化成NAD+,在340nm波長下吸光度降低,NADH的氧化速率與ALT活力成正比。
試劑:
(1)比色法測定:
①0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。
A液:稱磷酸二氫鉀13.6g,溶于水中,加水至1000ml,冰箱保存。
B液:稱磷酸氫二鈉(含兩個結晶水)17.6g,溶于水中,并加水至1000ml,冰箱保存。
取A液80ml,B液420ml混合,置冰箱內保存即可。
②ALT基質液:精確稱取DL-丙氨酸1.79g和α-酮戊二酸29.2mg,溶于50ml磷酸鹽緩沖液中,用1mol/LNaOH溶液(約0.5ml)校正pH7.4,再加磷酸鹽緩沖液至100ml,可穩定2周。加麝香草酚90mg,可延長使用時間。
③1mol/L2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:稱取DNPH19.8mg,溶于1000ml1mol/LHCl中,置室溫保存。
④0.4mol/LNaOH溶液:溶解16.0gNaOH于水中,并加至1000ml,置帶塞塑料瓶內,置室溫保存。
⑤2mmol/L丙酮酸標準液:可購買或自配。準確稱取22.0mg丙酮酸鈉(AR),置于100ml容量瓶中,加0.05mol/L硫酸至刻度。
(2)連續監測法:
①基質液的成分和濃度(IFCC):100mmol/LTris緩沖液(pH7.5),15mmol/Lα-酮戊二酸,500mmol/LL-丙氨酸,0.18mmol/LNADH,0.1mmol/L磷酸吡哆醛,1200U/L乳酸脫氫酶。
②市售試劑盒:按說明書用蒸餾水或稀釋液溶解,用后置冰箱保存,一般可穩定4天。
操作方法:
(1)比色法測定:其基質液37℃預溫,按表1操作。
混勻,置37%水浴20min,各管加0.4mol/LNaOH溶液5ml,混勻,置室溫5min后,在505nm處用對照管調零點,讀取各管吸光度,查標準曲線即得ALT活力單位。
(2)連續監測法:各實驗室可根據本室的分析儀型號及操作說明書而定。主要參數:340nm波長,37℃,樣本與試劑體積比為1∶10。
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