三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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1.溶壁微球菌平板的制備溶壁微球菌在使用前于瓊脂斜面培養(yǎng)基上傳代一次,然后再接用于普通瓊脂平板37℃培養(yǎng)24h。用無(wú)菌蒸餾水洗下菌苔,2000r/min離心30min,棄上清。再加蒸餾水輕輕混勻,2000r/min離心30min,棄上清,稱沉淀物濕重,用無(wú)菌蒸餾水配成100g/L的濃菌液(菌液應(yīng)在臨用前配制,不宜存放過(guò)久),加熱殺死,備用。
2.稱瓊脂粉1g,加入的1/15mol/LpH6.4PBS100ml,即成1%瓊脂。
3.取溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品,用1/15mol/LpH6.4PBS制成5、25、100mg/L稀釋液。
4.取己配制好的菌液1ml,加到50~60℃己溶化的1%瓊脂中,搖勻,傾注平板(直徑7~9cm平板加1%瓊脂15ml),待冷凝。
5.用打孔器在溶壁微球菌瓊脂平板上打孔,孔間距18~20mm,用牙簽挑去孔內(nèi)瓊脂。
6.用毛細(xì)吸管取唾液(新鮮收集,盛于潔凈平皿內(nèi),取上層清液)或血清,加入瓊脂孔內(nèi)。同時(shí)在另一孔內(nèi)加滿標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶作為陽(yáng)性對(duì)照。
7.置25~30℃18~24h,觀察結(jié)果。
8.在每批測(cè)定同時(shí),將各種濃度的溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)液加于小孔中,同法測(cè)定溶菌環(huán)直徑,用半對(duì)數(shù)紙,以溶菌酶濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),溶菌環(huán)直徑為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從曲線上查出每毫升待檢品所含溶菌酶的微克數(shù)。
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