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血管性假血友病因子-檢查項目-大眾養生網

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血管性假血友病因子

基本信息

  • 專科分類：
  • 檢查分類： 血液檢查
  • 適用性別： 男女均適用
  • 是否空腹： 　空腹
  • 手術參考價： 55元
  • 科　室：

血管性假血友病因子檢查簡介

用因子Ⅷ相關抗原(ⅧR∶Ag)單種抗血清與瓊脂混合制成薄板，加入一定量的受檢血漿(抗原)，通電后，在電聲作用下形成特異的火箭樣免疫沉淀峰，此峰的高度與抗原濃度成正比。

血管性假血友病因子檢查過程

取材：血液

血管性假血友病因子的測定原理：在含抗血管性血友病因子相關抗原（VWF∶Ag）抗體的瓊脂板中，加入一定量的受檢血漿（抗原），在電場作用下，定量的抗原在含定量抗體的瓊脂中泳動。在一定的時間內出現抗原抗體反應所形成的火箭樣沉淀峰，該峰的高度與抗原濃度成正比，以此可以計算VWF∶Ag的量。此法為Laurell免疫火箭電泳法。

試劑：

（1）三羥甲基氨基甲烷（Tris）-巴比妥緩沖液（pH值8.8）：巴比妥鈉4.88g，巴比妥1.235g，Tris2.890g，加水至1L。

（2）9g/L瓊脂糖：瓊脂糖0.9g，Tris-巴比妥緩沖液100ml。將瓊脂糖置于Tris-巴比妥緩沖液中，加熱溶解，乘熱用薄層棉花過濾后使用。

（3）血清：兔抗人VWF∶Ag抗血清。

（4）4.4mmol/L磷鉬酸溶液：磷鉬酸10g，加水至1L，溶解后用濾紙過濾使用。

（5）有機玻璃框：框內徑8cm×8cm，厚1.5mm。

操作方法：

（1）取一定量VWF∶Ag抗血清，用三羥甲基氨基甲烷-巴比妥緩沖液稀釋10倍，另取5g/L瓊脂糖三羥甲基氨基甲烷-巴比妥緩沖液隔水融化，冷卻至56℃。然后將預溫至56℃的稀釋VWF∶Ag抗血清1∶60混合（視抗體效價而定），制成8cm×8cm、厚1.5mm的瓊脂板，距玻板一邊約2cm處打一排小孔，徑孔3mm，孔間距為5mm。

（2）將瓊脂板置于電泳槽內，孔朝陰極，用濾紙作鹽橋，用定量注射器吸取原血漿1∶2、1∶4、1∶8、1∶16等不同倍數稀釋的健康人血漿各10μl，分別加入抗體瓊脂板小孔里。待檢血漿樣品用Tris-巴比妥緩沖稀釋1倍后，加入各樣品孔內。每孔加量均為10μl。

（3）電泳條件：電泳110～150V，電流約5mA/塊板，時間18h，溫度低于15℃。

（4）電泳完畢，取出凝膠板浸于4.4mmol/L磷鉬酸染色液中20min以上，然后再放入生理鹽水中浸泡10min，即可見明顯火箭狀沉淀峰，也可用氨基黑按常規方法染色。

（5）染色后，用雙分規測量火箭電泳峰的高度（從加樣孔上緣到峰頂），將標準血漿5個讀數，通過回歸方程得出標準曲線，然后求出各測定樣品VWF∶Ag的含量，再乘以稀釋倍數（×2），即樣品實際濃度。表示相當于正常血漿的百分率。

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