三級甲等綜合醫院國營
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主要分五項檢查:
一、細胞總數
1、直接計數法適用于腦脊液標本比較清亮或微混。用滴管吸取已混勻的腦脊液標本少許,直接滴入細胞計數板,充入計數池內,靜置2~3分鐘,低倍鏡下計數兩個池內的四角和中央大格共10個大格內的細胞數,即為1μl腦脊液中的細胞總數(紅、白細胞總數)。在書寫報告時,再換算成每升腦脊液中的細胞總數。
2、稀釋計數法適用于如果腦脊液的細胞過多、混濁或帶血的腦脊液。可用血紅蛋白毛細吸管吸取混勻的腦脊液20μl,加入有紅細胞稀釋液0.38μl的小試管中,混勻后滴入計數池內,用低倍鏡計數4個大方格的細胞總數,乘以50,即為每微升腦脊液的細胞總數,最后換算成每升腦脊液的細胞總數報告。
二、白細胞計數
1、直接計數:非血性標本,用吸管吸取冰乙酸后全部吹出,使管壁僅附著少許冰乙酸,然后用同一吸管吸取少量混勻的腦脊液標本,數分鐘后紅細胞就會完全溶解,再滴入計數池內,按上法計數。
2、稀釋計數:如白細胞過多,可用白細胞稀釋液稀釋后,按上法計數,注意計數結果應乘以稀釋倍數。
3、血性標本的校正計數:混有血液的腦脊液標本混勻后,用1%的冰乙酸溶液稀釋后仍按上法計數。為了剔除因出血而帶來的白細胞,可用下式進行校正。每微升CSF內白細胞校正數=每微升CSF未校正的白細胞數-
三、白細胞分類計數
1、直接分類法:在白細胞直接計數后,轉高倍鏡觀察,依據細胞形狀和細胞核的形態進行分類,共計數白細胞和內皮細胞100個,分別計算單個核細胞和中性粒細胞所占的比例,以百分數表示。如白細胞總數不足100個,則直接寫出單個核細胞和中性粒細胞的具體數字。如白細胞總數在30以下,可不做直接分類計數或改用染色分類計數。
2、染色分類法:腦脊液標本離心,取沉淀涂片,制成均勻薄膜,置室溫或37℃孵箱中,干燥后以瑞氏染色,油鏡下進行分類計數。以百分比表示之。
四、病原體形態學檢查
1、細菌臨床懷疑流行性腦脊髓膜炎或化膿性腦脊髓膜炎時,應做細菌學涂片檢查。操作如下:
(1)腦脊液標本2~3ml,以3000rpm離心15分鐘,去上清液,將沉淀物涂在潔凈玻璃片上,共制片2張,涂片自然或在37℃溫箱中干燥固定,且勿用火焰固定。
(2)涂片固定后,一張用亞甲藍染色,另一張用革蘭氏染色。
(3)革蘭氏染色涂片用于檢查肺炎雙球菌、流感桿菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、鏈球菌、大腸桿菌等,亞甲藍染色用于檢查腦膜炎雙球菌。如找到細菌,則按其染色性質及形態報告。
(4)如懷疑結核性腦膜炎,可將腦脊液標本靜置24小時,取其液面薄膜涂片,置37℃溫箱中干燥固定,作抗酸染色,油鏡下找抗酸桿菌。
(5)采集標本時應注意污染。顯微鏡觀察時應注意細胞內外的細菌形態,報告時應予以描述。
2、真菌檢查—新型隱球菌的檢查
(1)取腦脊液標本,以2000rpm離心10分鐘,沉淀物涂片,加經過過濾的優質細墨汁一滴,混合后加蓋玻片顯微鏡下檢查。
(2)先用低倍鏡觀察,如發現在黑色背景下有圓形透光小點,中間有一細胞大小的圓形物質,即轉用高倍鏡仔細觀察其結構,新型隱球菌直徑5~20μm,可見明顯的厚夾膜,周圍有較強的折光,并有出芽的球形孢子。
(3)發現上述特征,即可報告墨汁涂片找到“隱球菌屬”。并須進一步作真菌培養。
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