三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學(xué)、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級(jí)甲等醫(yī)院,是國(guó)家衛(wèi)生健康委指定的全國(guó)疑難重癥診治指導(dǎo)中心,最早承擔(dān)高干保健和外賓醫(yī)療任務(wù)的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學(xué)教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)國(guó)家 級(jí)
一、標(biāo)本采集
許多無(wú)牙胞厭氧菌是人體的正常菌群,在采集標(biāo)本時(shí)盡量避免正常菌群的污染。應(yīng)該采取沒(méi)有正常菌群污染的標(biāo)本。標(biāo)本采取后應(yīng)迅速送檢,立即接種,放入?yún)捬醐h(huán)境中培養(yǎng),盡量減少空氣接觸,以免厭氧菌死亡。
二、涂片鏡檢
膿液標(biāo)本可直接涂片染色后觀察細(xì)菌形態(tài)特征、染色性、菌數(shù)多少等供選擇培養(yǎng)基和判定結(jié)果時(shí)參考。
三、接種培養(yǎng)
厭氧菌在有氧的情況下不能生長(zhǎng)。要培養(yǎng)厭氧菌,必須創(chuàng)造一個(gè)無(wú)氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢(shì)。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基,牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多,可根據(jù)實(shí)際情況選用。
1.厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管,可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng),厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養(yǎng)出來(lái)。
2.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來(lái)培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內(nèi)裝氣體發(fā)生管(有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內(nèi)在半小時(shí)內(nèi)造成無(wú)氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài),可以孵育。
3.厭氧手套箱(Anaerobieglovebox)是迄今為止國(guó)際上公認(rèn)的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器之一。它是一個(gè)密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個(gè)有機(jī)玻璃做的透明面板,板上裝有兩個(gè)手套,可通過(guò)手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作,故名。箱側(cè)有一交換室,具有內(nèi)外二門(mén),內(nèi)門(mén)通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱,先打開(kāi)外門(mén),放入交換室,關(guān)上外門(mén)進(jìn)行抽氣和換氣(H2,CO2,N2)達(dá)到厭氧狀態(tài),然后手伸入手套把交換室內(nèi)門(mén)打開(kāi),將物品移入箱內(nèi),關(guān)上內(nèi)門(mén)。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài),也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢(qián)殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究,大量培養(yǎng)基可放入作預(yù)還原和厭氧性無(wú)菌試驗(yàn)。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動(dòng)調(diào)節(jié)。
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