三級甲等綜合醫院國營
北京協和醫院是集醫療、教學、科研于一體的現代化綜合三級甲等醫院,是國家衛生健康委指定的全國疑難重癥診治指導中心,最早承擔高干保健和外賓醫療任務的醫院之一,也是高等醫學教育和住院醫師規范化培訓國家 級
取材:血液
乙型肝炎e抗原的測定原理:本試驗是在預包被抗-HBe的微孔板上進行的二階段反應。在第一階段,將酶標抗體加入試驗微孔中,并孵育一定時間。如標本中存在表面抗原便會與包被在微孔表面的抗體結合,同時與酶標抗體結合形成包被抗-HBe-HBeAg-酶標抗體固化復合物。假如標本中沒有HBeAg則無法形成這種復合物,未結合的血清或血漿蛋白將在洗滌過程中被洗去。在第二階段,加入TMP,如微孔中存在固化的復合物,則OPD被氧化形成有色的終產物,加入硫酸后這種反應將終止。
試劑:國內有商品化試劑盒供應,內含抗HBe包被反應板(條),抗HBe-HRP應用液,HBeAg試劑(中和試劑)以及陰、陽性對照血清,抗HBe陰、陽性對照血清,洗滌液,底物液及終止液等試劑。
操作方法:按試劑盒使用說明書進行操作。
(1)兩步法操作:
①加樣品:檢測HBeAg時,在包被反應板(條)各孔內加入樣品100μl,每次試驗有陰、陽性對照,37℃保溫2h,洗板4次。檢測抗HBe時,各孔加入中和試劑50μl及樣品50μl,每次試驗有陰、陽性對照,37℃保溫2h,洗板4次。
②加抗HBe-HRP:各孔加入抗HBe酶結合物100μl,37℃保溫2h,洗板4次。
③顯色:各孔加入底物液100μl,37℃保溫15min后加終止液1mol/L硫酸50μl。
④結果判讀:A.目測法:檢測HBeAg時,無色為陰性,淡黃色至橘色為陽性。檢測HBe時,橘紅色為陰性,無色及淡黃色為陽性。B.比色法:在酶標儀上,以試劑空白校零點,測各孔在492nm光密度值。
(2)一步法操作:
①加樣品:同時加中和試劑及抗HBe-HRP。A.檢測HBeAg:在包被反應板(條)各孔內加入樣品50μl及抗HBe-HRP100μl,混勻后37℃保溫1h,洗板4次。B.檢測抗HBe:各孔內加入樣品50μl,中和試劑及抗HBe-HRP各50μl,混勻后37℃保溫1h,洗板4次。
②顯色和判讀結果:同兩步法。
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