三級甲等綜合醫院國營
北京協和醫院是集醫療、教學、科研于一體的現代化綜合三級甲等醫院,是國家衛生健康委指定的全國疑難重癥診治指導中心,最早承擔高干保健和外賓醫療任務的醫院之一,也是高等醫學教育和住院醫師規范化培訓國家 級
(一)血小板釋放顆粒及活化功能的測定
血小板胞漿內含有α2顆粒、致密顆粒以及溶酶體等,當誘聚劑加入后會引起這些顆粒的釋放,這個過程稱為血小板釋放。可以通過測定5HT或腺苷酸來加以判斷。5HT測定有熒光分光光度測定法和同位素測定法兩種。
α顆粒的釋放主要通過血漿β血小板球蛋白(βthromboglobulin,βTG)和血小板第4因子(plateletfactor4,PF4)測定。PF4和βTG是血小板α顆粒所含的特異蛋白質,測定采用ELISA法。其升高表示血小板被激活及釋放反應亢進,也見于血液高凝狀態和血栓性疾病,
血小板a顆粒膜蛋白140(GMP140),又稱P選擇素(Pselection),本身也是比較可靠的血小板活性的檢測指標。利用抗GMP140的單克隆抗體可以分別定量測定血漿內或血小板膜上GMP140的含量。其升高代表血栓性疾病、自身免疫性疾病[如系統性紅斑狼瘡、特發性血小板減少性紫癜癥(ITP)],代謝性疾病(如糖尿病并發周圍血管疾病)。GMP140被認為是反應血小板釋放反應的“金標準”。然而迄今為止,這些標記物與血小板聚集率的相關性如何,尤其在多種抗血小板藥物治療的情況下,還知之甚少。但也有實驗證明,血小板脫顆粒很快便和GMP140脫離卻依然存在于血液循環中并具有活性。
全血法流式細胞儀(FCM)在血小板功能檢測方面已取得了較大進展,可用于血小板功能失調的診斷,表面受體密度的定量,對活化血小板的檢測,監測血小板對激活劑的反應,監測血小板的代謝過程,抗血小板用藥時監測,血小板減少癥中產物的監測,血小板相關的免疫球蛋白G、血小板生存率檢查及信號轉導等方面。FCM能利用極少的血樣本,通過特異性血小板抗體及染料靈敏、特異地檢測血液中活化血小板,并評價其功能。同時應用FCM可以通過對活化血小板表面標記物的檢測進行心血管疾病的預測。
當前FCM已應用于血小板高反應性疾病(心、腦血栓病)、血小板低反應性疾病(血小板無力癥)、骨髓移植療效評估(新生血小板)、血小板減少癥(ITP)及GPⅡb/Ⅲa拮抗劑治療監測等領域。但因流式細胞儀價格高昂,檢測費用高,儀器操作復雜;為了避免體外活化,血樣需在45min內處理,不能久置;另外,流式細胞儀僅檢測循環中的血小板功能,而對βTG、PF4和血栓素A2(TXA2)等可反映血管壁上血小板的活化及新近被清除的血小板的功能指標不能檢測。這些因素都進一步限定了其應用。(二)AA代謝產物測定
血漿血栓烷B2(thromboxaneB2,TXB2)的測定。血小板AA代謝主要活性產物是TXA2,后者很不穩定,很快自行轉化為穩定的TXB2。一般通過測TXB2來反映TXA2的生成。TXB2測定采用ELISA法:用TXB2BSA包被酶標反應板,加入受檢血漿和TXB2抗體,包被TXB2,與樣品TXB2競爭性地與一定量抗體結合,加酶標第二抗體和底物,根據顯色反應推算出樣品的TXB2含量。值得注意的是,TXB2水平持續升高不僅反映了血小板的COX1活性未被抑制,還反映了非COX1途徑所產生的TXA2水平,因此,TXB2水平是檢測抗血小板治療抵抗的最有價值的方法。
(三)血小板內環腺苷酸(cAMP)和環鳥苷酸(cGMP)測定
cAMP和cGMP屬第二信使系統,調節血小板功能。當cAMP產生減少時血小板發生聚集反應,而cAMP產生增多時血小板不發生聚集反應;相反,當cGMP產生減少時血小板不發生聚集反應,而cGMP產生增多時血小板發生聚集反應。參考范圍(ELISA法):cAMP為每109個血小板中(1518±724)pmol,cGMP為每109個血小板中(046±024)pmol。
(四)其他血小板檢測
1血小板白細胞結合體檢測:血小板表面的GMP140可以特異性地與白細胞表面的GMP140糖蛋白配體1(PSGL1)結合。在血小板和白細胞活化時,GMP140與PSGL1都增加,反映血小板與白細胞的結合增多。這對血栓病的診斷和研究具有重要的意義。
2血小板微顆粒(PMP)檢測:血小板被激活后,以出芽方式形成囊泡或以偽足斷裂方式形成PMP。PMP的體積小(直徑01~10μm),但有完整的膜結構和功能。FCM檢測PMP的參考范圍:每104個血小板中(58±15)個。PMP增多反映血小板破壞或活化。PMP升高代表血栓性疾病;減低見于先天性AA代謝障礙性疾病,服用阿司匹林、苯磺唑酮、咪唑等藥物。
3血小板活化的新標志物:包括血小板促凝活性、微粒和單核細胞血小板聚集三項指標。當前很多實驗表明在穩定型心絞痛、冠狀動脈介入治療、急性心肌梗死等中,單核細胞血小板聚集物比血小板表面的GMP140在活體內血小板激活的標記方面更敏感。
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