一、抗原檢測

　　1.直接涂抹染色(DT)法 傳統(tǒng)的結(jié)膜刮片和宮頸拭子經(jīng)姬姆薩或碘染色檢查上皮細(xì)胞漿內(nèi)有無包涵體是衣原體檢查常用的篩選試驗(yàn)。如果操作和標(biāo)本采取得當(dāng)，其特異性強(qiáng)，結(jié)果可靠，但敏感性差，尤其是碘染色，只能檢查含糖原的包涵體。

　　2.細(xì)胞培養(yǎng)法 用于衣原體培養(yǎng)者，常用經(jīng)放線菌酮處理的單層McCoy細(xì)胞。經(jīng)孵育后，用熒光標(biāo)記的抗體、酶結(jié)合的單克隆抗體、碘或姬姆薩染色，胞漿中出現(xiàn)特征性的包涵體，即可考慮有衣原體的存在。本法的敏感性為80%～90%。由于細(xì)胞培養(yǎng)法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且條件和技術(shù)要求較高，不能作為臨床常規(guī)檢查方法，因此不適用于大規(guī)模篩選及流行病學(xué)調(diào)查。

　　3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)ELISA是用來檢測臨床標(biāo)本中衣原體抗原的一種有效方法。所用抗體多為衣原體屬脂多糖單克隆或多克隆抗體，特異性強(qiáng)。本法對嬰兒結(jié)膜炎檢測的敏感性和特異性分別為88%和94%，鼻咽部感染檢出率和特異性分別為87%和92%。以此法檢測1529例生殖道標(biāo)本，并與培養(yǎng)法結(jié)果比較，其敏感性男性為91%，女性為88%;特異性均為99%。本法具有簡便快速的特點(diǎn)，適用于大量標(biāo)本的檢測，但與細(xì)菌有交叉反應(yīng)，可出現(xiàn)假陽性，尤其是鼻咽部標(biāo)本。

　　4.直接免疫熒光法(DFA) 本法簡便、快速、特異性好，敏感性和特異性隨標(biāo)本部位及人群而異。新生兒結(jié)膜炎的陽性率達(dá)100%，(而組織培養(yǎng)為94%)鼻咽部標(biāo)本的敏感性為85%，特異性為75%。宮內(nèi)膜和輸卵管等部位的標(biāo)本較培養(yǎng)法敏感。它還用于精液、直腸及因運(yùn)輸或保存不當(dāng)使衣原體失活標(biāo)本的檢測。用多克隆熒光抗體檢測可診斷衣原體感染，但不能區(qū)別其類型，單克隆熒光抗體可直接定型，識別的是沙眼衣原體的原生小體，而非較大且少見的細(xì)胞內(nèi)包涵體。熒光顯微鏡的質(zhì)量和操作技術(shù)均可影響結(jié)果。對操作熟練者來說，本法的敏感性和特異性至少和ELISA相同。DFA可代替細(xì)胞培養(yǎng)法，以篩選生殖道感染中等至高度流行的年輕人群及確診有癥狀的新生兒結(jié)膜炎。

　　5.斑點(diǎn)免疫結(jié)合法(DIBA)本法是以微孔薄膜作固相載體，吸附抗原后進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，在膜上出現(xiàn)著色斑點(diǎn)為陽性結(jié)果。其敏感性為100%，特異性為92.4%。與細(xì)胞培養(yǎng)法比較，其符合率為96.7%。DIBA適用于大批量標(biāo)本的檢測，但結(jié)果需3天。

　　6.核酸探針 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，DNA雜交技術(shù)已進(jìn)入衣原體檢測領(lǐng)域。以82S標(biāo)記7Md質(zhì)粒制備的探針，檢出Ct的敏感性和特異性分別為91%和80%。用沙眼衣原體性病淋巴肉芽腫(LGV)-Ⅱ的質(zhì)粒DNA和LGV-I的染色體DNA作探針，可特異性地檢測沙眼衣原體的15個(gè)血清型抗原，而與單純皰疹病毒(HSV)，淋球菌等41種微生物無交叉反應(yīng)。檢測范圍可達(dá)10～100pgDNA。用血清學(xué)、單克隆抗體及組織培養(yǎng)鑒定為陰性的某些標(biāo)本，用DNA探針檢測可得到陽性結(jié)果。用沙眼衣原體TE-55株全DNA制備分子探針，能特異性地檢出衣原體的15個(gè)血清型。該探針具有特異性高，敏感性強(qiáng)，完全有可能用于衣原體的臨床診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查。原位DNA雜交用于宮頸刮片和直腸活檢標(biāo)本，其結(jié)果與培養(yǎng)相似。但也有認(rèn)為，在生殖道標(biāo)本檢測中，DNA探針不夠敏感，特別是培養(yǎng)為弱陽性的標(biāo)本。

　　7.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)PCR是近年發(fā)展起來的新技術(shù)，能使核酸分子按幾何級數(shù)擴(kuò)增，使樣品中極微量的核苷酸分子迅速地?cái)U(kuò)增，然后通過核酸分子的檢測獲得極敏感的結(jié)果。PCR簡便快速，具有高度的敏感性和特異性，且可同時(shí)從標(biāo)本中直接鑒定衣原體的種和型別。從7.5Kb質(zhì)粒ORF-3選擇了一對具有種特異性引物，經(jīng)40次PCR循環(huán)，電泳檢測的靈敏度達(dá)10-17gDNA。

　　二、抗體檢測抗體檢測的價(jià)值不大，因生殖道感染無并發(fā)癥者仍產(chǎn)生低滴度的抗體;約20%急性衣原體尿道炎患者不產(chǎn)生抗體;有人認(rèn)為IgA意味著現(xiàn)癥感染，但PID者可長期存在IgA。衣原體抗體檢測的常用方法有以下幾種。

　　1.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)適用于LGV、鸚鵡熱及肺炎衣原體感染的診斷，其敏感度較低。當(dāng)效價(jià)≥1∶32提示為衣原體感染，但不能鑒別其種類。用于LGV的證實(shí)試驗(yàn)，要求效價(jià)≥1∶64。

　　2.微量間接免疫熒光試驗(yàn) 本試驗(yàn)是診斷肺炎衣原體感染最敏感的方法之一。以肺炎衣原體作為抗原進(jìn)行試驗(yàn)，檢測特異性抗體。若雙份血清效價(jià)呈4倍增加，或單分血清IgM抗體效價(jià)≥16，或IgG抗體效價(jià)≥512，可診斷為急性感染。既往感染者的IgG抗體效價(jià)介于8～256之間。臨床上依據(jù)血清學(xué)試驗(yàn)可將肺炎衣原體感染分為原發(fā)和繼發(fā)兩種。原發(fā)感染IgM出現(xiàn)早、效價(jià)高，IgG出現(xiàn)較晚，IgA反應(yīng)較弱或不出現(xiàn)。繼發(fā)感染IgG反應(yīng)迅速，一般不出現(xiàn)IgM和CF抗體。因此，抗體檢測應(yīng)根據(jù)標(biāo)本采集時(shí)間，結(jié)合臨床資料綜合分析才能得出正確結(jié)論。